RNA提取纯化操作过程，提取的时候有什么注意事项呢?

RNA提取纯化操作过程：

1. 加入AMPure XP 磁珠试剂
2. 磁珠与核酸结合
3. 结合有核酸的磁珠与杂质分离
4. 乙醇洗涤
5. 加入洗脱液
6. 转移洗脱产物

RNA提取注意事项：

1.RNA在细胞内极易降解，样本选择时***定要选取新鲜的样本组织或者取样后迅速低温处理（液氮速冻）；样本出现多次反复冻融后，RNA得率会严重下降，也会导致RNA降解；RNA提取环境要保持无RNA酶污染；

2.RNA容易受到环境污染导致RNA严重降解，建议实验过程中注意更换实验手套，使用所有耗材应该均无RNA酶的***次性耗材；

3.试剂盒中BufferEB中含有少量EDTA，可能影响下游实验，使用时适当稀释，如果用其他洗脱液洗脱，要确保PH>7.5，PH过低影响洗脱效率；

4.离心柱漂洗完成后，尽可能烘干柱膜上残留乙醇，残留乙醇会影响洗脱效率和下游实验效果；柱膜也不建议过度干燥，没有乙醇味道残留***好，如果过度干燥可能影响RNA溶解；如果A260/230值过低，说明样本提取过程中漂洗不彻底，有盐离子残留，建议增加漂洗次数；

5.对于RNA提取，A260/280<1.9说明有可能存在DNA污染或者蛋白污染，如果洗脱样本时没有使用BufferEB，而使用ddH20（确保无RNA酶），比值或偏低，因为Ph值会影响吸光值，并不表示样本纯度低；

6.如果提取的样本RNA发生严重降解，可能是由于裂解液没能完全灭活样本中RNA酶，建议增加裂解液使用量（具体参见说明书）或者降低样本初始量；

7.RNA完整性可以通过超微量核酸检测仪检测或者琼脂糖凝胶电泳（电泳条件：胶浓度1%；1XTAE电泳缓冲液）来判断；***般样本RNA电泳条带为两条带，对于植物样本，有可能存在叶绿体RNA干扰，条带数量大于4条，并不表示RNA提取发生降解；

8.电泳环境受到RNA酶污染，也会造成RNA降解，电泳检测不准确，确保电泳过程中电泳缓冲液，上样缓冲液无RNA酶污染；

9.RNA提取***般是传统TRIzol方法和改进的柱式方法；对于TRIzol法进本可以提取大部分样本RNA，但是对于多糖多酚植物样本，建议使用者尽量选择具有针对性的试剂盒（参见目录），传统TRIzol法无法有效去除多糖多酚这些次生代谢物；

10.对于植物样本，样本处理量无法统***确定，对于***般样本（烟草，拟南芥等），提取量不超过100mg鲜重组织或者20mg干重组织，对于复杂样本，建议初始样本量不超过50mg鲜重或者10mg干重组织；如果需要较高的RNA量，可以采取多管浓缩的方法提取RNA;

11.对于植物样本，如果离心时堵塞离心柱，建议减少初始样本量；

12.对于血液样本，如果样本中含有血块，说明样本收集时未加入血液抗凝剂；建议重新收集样本并加入EDTA，肝素，柠檬酸等抗凝剂；

13.RNA浓度及纯度判断：[RNA]μg/ml=A260 x稀释倍数x40.0 （40.0：RNA的平均吸收系数）