还在用紫外吸收法定量蛋白质？更高灵敏度的蛋白质定量神器来袭 | 技术头条
- 2024-11-11 09:24:00
还在使用紫外吸收法进行蛋白质定量分析？告别低灵敏度、对样品纯度要求高（如体系中残留的核酸干扰吸光度）的蛋白质定量！
现在，仅需***台 Duetta? 荧光及吸收光谱仪，操作简单、超低检测限、杜绝残留核酸的干扰，快速实现蛋白质/抗体的定量分析。
图 1 转铁蛋白三维结构
使用10 mM PBS，配制浓度范围为0.75 μg/mL 至 50 μg/mL 的转铁蛋白溶液，用于荧光和吸收光谱测量。使用相同的缓冲液（不含蛋白）作为空白对照。
*实验使用的激发波长为250 nm，发射波长为265 nm到 550 nm，CCD 积分时间为2秒，狭缝为10 nm。本实验使用台式分光光度计作为对比。
01. 吸收光谱模式 图 2 两种仪器的吸收光谱对比 02. 荧光光谱模式 使用 Duetta? 荧光光谱模式检测转铁蛋白溶液的荧光光谱，如图3所示。对***低浓度的放大结果显示，检测限约为0.75 μg/mL。 图 3 转铁蛋白在0.75 μg/mL- 50 μg/mL 的荧光发射光谱 在0.75 μg/mL 至50 μg/mL 的浓度范围内， Duetta? 在***大发射波长下的荧光强度、分光光度计测得的吸光度、转铁蛋白浓度的关系如图4所示。图中显示 Duetta? 对转铁蛋白的检测限约为0.75 μg/mL，荧光强度与浓度呈正相关。对比使用台式分光光度计检测到的***低浓度为25 μg/mL，Duetta? 的灵敏度高33倍。 这证实了 Duetta? 在检测蛋白质时具有远高于传统紫外吸收法的灵敏度，因此非常适合用于低浓度蛋白质的定量分析。 图 4 使用 Duetta? 和分光光度计检测转铁蛋白浓度的比较 本文使用 HORIBA Duetta? 荧光及吸收光谱仪进行荧光光谱和吸收光谱的测量。Duetta? 可以同步检测荧光光谱与吸收光谱，是蛋白质定性、定量、聚集分析利器。
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