荧光分光光度计的操作步骤

荧光分光光度计的操作步骤：

1.开机：接通电源，打开主机开关，点燃(打开)光源后,根据说明书要求启动计算机。

2.检测前准备：参照仪器说明书,在20天内至少进行***次激发校准和发射校准，检测前仪器应预热。

3.工作条件的选择：环境温度应在20°C土5°C;相对湿度不大于70%;电源稳定，无磁场、电场干扰。根据样品的特性及荧光强度,选择合适的仪器工作条件(如狭缝、PM增益、响应时间等)。

4.基本测定

(1)荧光激发光谱测定

设置仪器参数，扫描发射波长，找到maxhem，以此为发射波长，记录发射强度作为激发波长的函数，便得到激发光谱。

(2)英光发射光谱测定

设置仪器参数，扫描激发波长，找到maxhex以此为激发波长，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。

(3)差谱测定

设置仪器参数，选择合适的工作方式，测定背景溶液的发射光谱并储存起来，在***定的工作方式下扫描样品溶液的发射波长，得到当时的光度值和储存的背景值之间的差示值，即差谱。

(4)峰面积积分

选择适当的工作方式，对样品溶液进行积分操作，即得到峰面积积分。

(5)荧光强度

选择合适的测量参数，设置入ex、hem，采用定点读数或扫描方式，即可测得所选波长处的荧光强度。

(6)定量测定

配制***系列已知浓度的标准溶液，在***定的测定条件下，设置入ex、入em，按照由稀至浓的次序，测定标准溶液的荧光强度，绘制荧光强度***浓度的工作曲线，不改变仪器参数测定未知溶液的荧光强度由工作曲线即可求出未知溶液的浓度。

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