赛默飞无氯仿提取RNA解决方案来了！
- 2024-04-01 09:21:30
TRIzol试剂 1977年，科学*** Axel Ullrich 和他的同事们提出使用异硫氰酸胍（Guanidine Thiocyanate）用于 RNA 的分离纯化，至1990 年，优化该方法后，推出商业化的 TRIzol 试剂。
赛默飞TRIzol试剂是***种即用型试剂，用于在1小时内从人类、动物、植物、酵母或细菌来源的细胞和组织样本中提取高质量的总RNA（以及DNA和蛋白质），TRIzol试剂在样本匀浆化时，可以破坏细胞，溶解细胞组分，同时高效的抑制RNA酶的活性，从而维持RNA的完整性。 TRIzol无氯仿解决方案 由于在TRIzol试剂的提取过程中，需要使用氯仿，而氯仿具有挥发性，会对眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜造成刺激，因此迫切需要***种无氯仿解决方案。经过赛默飞科学***的不懈探索，发现了1-溴-3-氯丙烷（1-Bromo-3-chloropropane ，BCP）可以替代氯仿，搭配TRIzol试剂提取RNA，接下来，小编就和大******睹为快——TRIzol无氯仿提取RNA的效果。 操作流程 在样本进行匀浆化时，加入0.2mL氯仿或者0.1mL BCP，进行RNA提取。 图1. 操作流程示意图，详细步骤如下： 加1mL TRIzol试剂，裂解样本，室温孵育5min。 加0.2 mL氯仿或 0.1 mL BCP，振荡混匀，孵育3min。 在4°C下12000×g离心样本15min。 取约500μL上清液至新样本管中。 加等样本体积的异丙醇，颠倒混匀，在4°C下孵育10min。 在4°C下12000×g离心10min，弃上清。 加1mL 75%乙醇，重悬沉淀，短暂涡旋样本，在4°C下7500×g离心5min，弃上清液。此步骤重复***次。 干燥5-10min，加20-50μL RNase-Free水，在55°C的水浴孵育10min。 实验结果 分别使用氯仿和BCP对5mg和20mg的兔的肝脏和脑组织，按照TRIzol试剂的说明书进行RNA提取，每组实验设置3个重复，对得到的RNA产物进行含量、纯度、完整性等进行评估。 RNA含量和纯度 图2. Nanodrop检测RNA的产量和纯度 RNA完整性测定 图3. Agilent 2100测定RNA完整性和计算RIN指标 RT-qPCR分析 图4. 对提取RNA进行RT-qPCR检测内参基因：GAPDH和ACTA2，说明BCP提取的RNA，与氯仿相比，内参基因表达量无显著差异。 图5. 提取RNA进行Xeno抑制性实验，说明，BCP和氯仿所提取出来的RNA不会扩增抑制后续的RT-qPCR实验，降低假阴性结果的可能性，确保RT-qPCR检测结果是准确和可控的，再次佐证了可以使用BCP搭配TRIzol试剂使用。 小结 在有机法提取RNA的过程中，赛默飞无氯仿提取后的RNA，含量高，纯度好，完整性指数高，可直接做后续的RT-qPCR实验。
(文章来源于仪器网)
