染色多孔板，怎么拍才好看？
- 2024-01-30 09:57:41
病毒噬斑实验 (Plaque assay) 指的是用待测病毒感染宿主细胞后，在固体介质的限制下，从***初感染的细胞中释放的病毒只能向宿主细胞周边扩展，经过***段时间的增殖，感染病变细胞聚集的区域会形成空斑，即病毒噬斑。不同的生长条件，不同种类的病毒，其噬斑形态也有显著差异。因此噬斑大小、分布，边缘情况都可以提供有关病毒生长和毒力因素的有价值的信息。
其基本步骤为：
1
培养宿主细胞：在多孔板中培养宿主细胞，达到汇合度90%以上；
2
配制固体介质/固体覆盖层：固体介质的配方多种多样，常见配方包括，0.6%琼脂糖，2%羧甲基纤维素 (CMC) 或2.4%胶体微晶纤维素 (avicel) 的水溶液，固体介质使用前需高压灭菌；
3
病毒感染：将不同稀释倍数的病毒感染液与宿主细胞进行共培养，***段时间后弃去病毒感染液，加入固体介质继续培养；
4
固定，染色：先向孔板中加入10%甲醛溶液，固定后弃去甲醛溶液，再加入0.5%结晶紫染液染色，待染液充分渗透后，用清水洗去浮色；
5
拍照并分析：用成像设备对多孔板进行成像，对每孔的噬斑数进行计算，对相同稀释倍数的复孔取平均值以计算病毒滴度，计算公式为：噬斑形成单位 (PFU/mL) =平均噬斑数/（病毒感染液稀释倍数×病毒感染液体积 (mL) ）。
***先，从机器里拿出我们平时拍WB的黑色样品盘和白色垫板，拍多孔板要用的是底部透明的这款透明样品盘。将多孔板放置在样品盘中间，将透明样品盘推入IQ800的下层样品仓，选择Colorimetric模式中的OD measurement，点击start进行拍摄就好啦。
图1：从左到右依次为透明样品盘、NP透镜、NP透镜导轨
(文章来源于仪器网)
