旋转式细胞培养系统（The Rotary Cell Culture System，以下简称RCCS）是目前世界上培养贴壁和悬浮细胞的***新的装置：RCCS中都能容易地进行培养；RCCS中能实现模仿父系组织的结构和功能的已分化的三维物质共同培养；

RCCS是***种重复性高、复杂的、三维的体外培养系统，用来仔细研究结构的变化，分离能控制正常组织分化和新生组织变形的生长和调控分子。Johnson航天中心的Synthecon，该系统原先是为保护在宇航中所进行的纤细的组织培养而设计的。然而，它的低剪切力、高的物质传递效率和微重力的独特环境，使我们在普通实验室的组织培养箱内也能生长出三维细胞组织。

Synthecon提供2种基本的RCCS容器：(CCCV)呈管状，有***个中央气体交换膜芯，它是为培养贴壁细胞所设计。(HARV)为盘状的培养容器, 其内壁由氧交换膜所组成。它是为培养悬浮细胞所设计。然而，实践证明，它也是***个理想的贴壁细胞的培养容器。

RCCS是水平旋转的、无气泡的膜扩散式气体交换的培养系统。

相比普通系统来说，新的RCCS的***个主要的优势是进行能分化或模仿父系组织结构和功能的组织培养。科学***能得到和在人体内***样的培养产物。这些细胞生长后形成与其父系组织类似的三维组织材料。因为破坏性的旋涡和碰撞力在水平的RCCS中是极小的，故这些生长是可能的。这个非常低的剪切力的培养环境对于需要通过培养来生长任何脆弱细胞类型是同样重要的。这些细胞类型包括(当然并不局限于)：杂交瘤细胞、淋巴细胞、骨髓、巨噬细胞、T细胞，甚至植物的原生质体和昆虫细胞。

Synthecon的RCCS使科学***能在普通的组织培养实验室内生成非常复杂的、脆性的组织。科学***如果需要连续监测他们的细胞培养的话，能轻易地在很短的时间内进行采样而并不损伤所进行的培养。加入细胞成分、化疗成分、营养成分、化学成分或试验性的化妆品而导致细胞培养变化的结果可被严密地观测。关于如何收集培养产物则是非常简单的，只要旋开底盖，倒出培养产物或用移液管吸。无须释放剂或使用刮器。Synthecon发明的RCCS来培养了近百种不同类型的细胞，包括人的正常的和恶变的细胞以及悬浮和贴壁细胞。例如，人的恶性黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌和恶性骨瘤的细胞株等。10%。然而，前列腺癌和乳腺癌组织在RCCS中就得到成功的培养。而且，这种组织培养的产物中不会含有干扰分析的鼠蛋白。

用中性（PH=7）洗涤剂：不要把容器的任何部件放在漂白的、酸性的或碱性的清洗溶液中。因清洗后容器中塑料和橡胶的部件中可能含有这些溶液中的有毒性化学物质的残留，会毒害细胞的生长。泡在含氯化物的漂白液中肯定会带来严重毒性问题。

铬酸盐等腐蚀性的试剂会损坏金属部件。研磨性的清洁剂或丙酮等强力的有机清洁复合物将使塑料部件受损并使之不能得到保修。

操作说明中所提供的清洗方法对我们来说已足够了。氧交换膜特别易被损坏。清洗容器时应使用中性的实验室清洗剂。手或软刷使用起来应非常小心。***好用手指的软表面轻刷。强度大的清洁剂和硬性的刷子会损伤塑料和橡胶部件。

尽量不要多玩弄整个装置，好意的搀和***终会使许多培养产物夭折。

极扁的电源和通讯线能非常方便地通过培养箱的密封条而不会破坏培养箱的环境。控制和电源***体单元能方便地放在培养箱的上面或旁边，但绝对不能放在培养箱内。

该系统不是转瓶培养装置，所以不能按转瓶的方法来操作。容器中的气泡会产生旋涡并且使细胞致死。请按下面将要讲的方法操作。对于在用注射器给容器抽真空时请不要用力过猛，否则会使氧交换膜破裂而不得不重新换膜。

请不要过分拧紧螺栓和配件。过分的用力会在塑料部件上留下伤痕。

过分高的高压蒸汽灭菌温度会很快地老化塑料和橡胶部件，并且使加样阀粘住。我们建议***合适的高压蒸汽灭菌温度为

脏的高压蒸汽灭菌装置中的有毒残渣会渗透到氧交换膜、塑料和橡胶部件上，从而使容器带毒。

我们建议在高压蒸汽灭菌的前夜，容器中应注满乙醇并且浸泡整夜。乙醇是极佳的无毒的去污染溶剂，它也会溶解和去除任何残留的增塑剂。在排空后准备进行高压蒸汽灭菌之前，容器须用培养***的水来漂洗。

在高压蒸汽灭菌的过程中，至少***个阀应被置于开启状态，以防止内压的产生。

在高压蒸汽灭菌之前，圆柱型容器的中央螺帽须旋松***圈。

在高压蒸汽灭菌之后须拧紧这些被松开的螺帽。

过分地拧紧螺帽会在塑料部件上留下伤痕。

容器应作为***个整体进行高压蒸汽灭菌，这样可避免在组装过程中的污染。

在接种前应使用培养液来漂洗容器。

由于培养液的配方随细胞种类和应用面的不同，没有***个绝对现成的配方可供参考。***般来说，在其它细胞培养设备中应用的很好的培养液的配方在

有湿度的组织培养箱可以减少通过硅橡胶氧交换膜的培养液的流失。这对于

有关特定的细胞培养技术请参见所附的参考资料。

注射器只有带旋锁转换接头后才可使用。因震动和回旋力会使无旋锁的注射器掉落，以致注射器接头的开口外露，使培养液的外溢从而导致污染。

气泡会产生旋涡使细胞致死。尽管可能只有小气泡会产生，***旦被发现就应立即用注射器来抽除，我们应当至少每天应检查***次。

为了使细胞在培养容器中得到均匀分布，旋转基座须水平放稳。这对圆柱型细胞培养容器

RCCS来说，合适的消毒技术可能是唯***可沿用的转瓶操作准则。105到110℃, 周期为30分钟。这被证明是足够的，如果还担心灭菌不够的话，我们建议您应当重新再进行***遍灭菌，而不能升高温度。HARV的周边螺帽在高压蒸汽灭菌之前也须旋松***圈。RCCS中能同样很好地应用。这些培养液能提供***个好的开端来开发特殊的配方以迎合特殊的应用。我们的参考资料提供了已成功应用于RCCS的好几个培养液配方的信息。10ml的HARV特别重要。(CCCV)尤其重要。

15到20RPM作为启动速度对于在微载体珠粒上的贴壁细胞来说是较为合适的。为了补偿培养物的沉降速率，转速必须进行调整。可见的细胞团在容器内形成***个流体轨道并且不与容器壁或中间的膜芯相碰。10RPM这个极低的转率时能极容易地悬浮。24小时内会完全贴附于微载体。如旋转停下来了，则氧交换会停止，细胞就会死亡。要得到好的有代表性的样本，在取样时容器不能停转。在实践中，我们常常在容器旋转的过程中用注射器来取样。

淋巴细胞等悬浮细胞在如***开始用极小的分生组织碎块来进行培养的话，微载体珠粒可能并不需要。

当容器旋转时，细胞会马上贴附在微载体上。不必要也不主张在贴附阶段使正在旋转中的容器停下来。细胞***般在 我们可研究细胞从正常生长，通过畸形生长和发育不良演变到肿瘤，这个细胞由正常生长到恶变的全过程。癌症治疗机构由此能进行化疗药物的筛选试验。爱滋和其它病毒的研究者从而可得到源源不断的人的骨髓和其它能感染、研究和希望用来生成疫苗的寄主细胞。

科学***已成功地用这个美***宇航局的至今所有在RCCS中培养的细胞都获得成功。在***个经常做的试验中，正常人的纤维细胞与人的结肠癌细胞共同培养。在不到***个月内，培养出数百种已分化的结肠癌的息肉，其密度为每直径为1cm的园中有***块。共有5个被分化的细胞类型被检测出，其中包括粘蛋白分泌性杯状细胞。在另外的试验中，恶性黑色素瘤和恶性黑色素细胞能连续生长100天以上。

众所周知，大多数人类的肿瘤是很难用其它方法在实验室中生长的，尽管人的癌细胞能被种植到免疫力缺乏的鼠上，但前列腺癌、乳腺癌在鼠上的传递率只有不到培养液、细胞和细胞团粒在容器内旋转，它们不与容器壁或任何其它易致伤的物体相碰。因该系统无推进器、空气升液器、气泡或搅拌器，故几乎没有破坏性的剪切力，使得大细胞团得以形成。

悬浮细胞和微载体珠粒上的贴壁细胞在水平的旋转式细胞培养容器内产生***个均匀的、极低剪切力的液体悬浮轨道。随着细胞的长大，可调节旋转的速度来抵偿沉降速率。

正常的、新生的、单个的以及共同培养的脆的、人的、贴壁和悬浮细胞在体外得以生长。 

圆柱型容器

高截面纵横比容器发明于它使研究者能对各种细胞进行高密度的培养；

凡用其它方法不能轻易地培养的细胞组织