由CompuCyte开发的新的细胞分析仪-激光扫描细胞仪(Laser Scanning Cytometer, LSC)，以多组参数分析细胞及形态，是当今世界上***先进的细胞生物学分析仪器,在细胞生物学、免疫学、病理学、药理学、遗传学、肿瘤学等领域已成为新***代强有力的研究工具,受到了生物医学界的极大关注, 已成为***内外的***个注目点。 

定量细胞内物质及组织扫描

多时段同点分析

适应多种样本类型，包括：

组织

 粘附细胞

具有完整的显微镜功能 

流式细胞仪已在全世界广泛应用。然而，仍有许多任务流式细胞无法完成，比如检测细胞粘附、相隔时间重复检测同***细胞和在细胞上或胞内定位探针染色位置。流式细胞仪很难检测只含有数百个细胞的样本，而此问题在检测只含有数百个细胞的多达1536个微孔时更加复杂了。***些仪器如共聚焦显微镜和微板扫描图像系统可作高分辨分析及提供其他分析功能，但只能提供低通量分析并要求操作者经验丰富。激光扫描细胞仪,它可以进行低分辨分析，像流式细胞仪***样对散射光和荧光进行多参数检测，从而提供高通量的分析。 

LSC应用：

关键应用示例

任何基于细胞学的研究

任何组织切片的研究 

细胞周期和DNA含量分析: 抗原表达, 免疫分型 

多元化分析：

凋亡

迁移

细胞活性

膜电位 

细胞周期信息由生物化学及形态学信息构成。

细胞周期可通过直接检测DNA的含量来获知。 

对生物学样本的多色分析: 因LSC具备了高通量的能力，在生物学单细胞分析领域和细胞分析学中已变得越来越重要。结合不同的技术与染色方法，可对任何***个单细胞的多色分析。对于细胞分析来说，玻片式细胞仪（SBC）是实现这种技术的理想工作，它不像流式细胞仪，它没有任何损耗，如样本是被固定的载玻片上的并能够重复进行染色并检测。方法和结果：我们在激光扫描细胞仪上（Laser Scanning Cytometer）进行了多种多色荧光分析实验。其中包括了不同的实验过程，（1）多色细胞分相反，对***份样本使用八种或更多荧光素进行染色；（2）重复染色，使用同***荧光标记的不同抗体进行染色后逐***分析；（3）荧光淬灭，根据荧光的不同淬灭特征进行不同的淬灭实验；（4）荧光激活，激活不同的荧光颗粒或染料；（5）光化裂解（裂解FRET染料）。通过LSC的重定位功能，可以以1um的精度对样本中的同***细胞重复定位，从而经过不同处理的样本可再次进行分析。结论：给合各种方法与技术，可在单细胞水平上进行多色荧光分析。 

同时分析多个样本中细胞对于培养物的反应在生物实验及化疗效果评估中有重要作用。在此我们使用LSC来对多孔药物诱导凋亡进行分析检测。材料：使用2-MNOH或其他常用的化学药物来诱导细胞凋亡。我们分析了96孔中经荧光标记的细胞凋亡情况。结果：我们证实LSC是***种在单细胞水平同时比较分析不同孔内细胞在不同时间及药物浓度情况下的变化。结论：这些数据有力说明了LSC适合于在单细胞水平同时、多参数分析不同细胞群体对药物的反应。

LSC，尺寸大约与研究级台式流式细胞仪相同大小，是当前制作最为精细的激光扫描细胞仪，可检测由标准488nm氩离子激光器激发的绿色(530-nm), 橙色 (580-nm),和红色 (610-nm) 荧光；由488nm或633nm氦氖激光器激发的远红(670-nm) 和近紫外 (750-nm)荧光。蓝色荧光素(460nm)可由400nm紫罗兰半导体激光器激发，绿色氦氖激光器(543-nm)也可选配。

LSC仪器检测为高分辨放大模式，一个典型的细胞图像包含有上百个像素。

在LSC上，激光聚焦光束（通常为空冷488nm氩离子激光或633nm氦氖激光）通过检流计驱动的一组透镜来获得光束的直径，然后经过显微镜的长通滤片，从而在标本上形成2.5至10nm直径的光束。

检流计是由一个“锯齿”信号来控制，它的振幅随时间呈线性增长随后又快速恢复初始值。当在线性信号部分时，激光聚焦光束在标本平面上呈线性移动。此线性移动的长度在171和685um之间，由物镜的放大率决定。激光束方向的荧光信号由显微镜的物镜收集，随后通过二向色滤片，然后经过不同带宽的滤光片分离进入其各的光电倍增管。光电倍增管信号以规律性的间距数字化，从而形成一组数据与0.5um扫描间距相一致的像素。在每一扫描线末端，显微镜的载物平台与扫描垂直的方向移动0.5um，然后整个过程重复进行。如此，仪器便可生成矩形扫描区域内一个或多个荧光的数字影像。LSC还集成了一个前向散射光信号，使用显微镜镜台下冷凝器来收集光信号，然后由一个光敏二极管来检测光散射信号，与流式细胞仪类似，前向方向也有一挡且挡穿透的激光。大角度散射光在实验机上可检测，但在现有的商品机中还不可用。

在流式细胞仪中，探测器或前置放大器输出的是***组脉冲信号，细胞在随意的时间里经过检测点形成了信号之间随意间隔；细胞的光散射信号和荧光信号可由脉冲信号的高度和面积或宽度来表示。在大多数仪器中，收集的信号被转化并存储为脉冲信号，拥有高度、面积和宽度值，然后由电子计算机转化这些信号作进***步分析。信号随着不规则的间隔（由细胞检测的随机时间决定）而被数字化并记录下来。
在激光扫描细胞仪中，探测器或前置放大器所输出的信号是***个对样本***定区域的光栅扫描信号，并以衡定的间隔被数字化，所产生的是数字矩阵信号，其中包括了***幅图片的***个原素或像素。有关***个细胞的数据以***个数量***的连续像素来表示；这个数量***在低分辨系统时可能是10，而在高分辨系统中会达到100。然而，尽管激光扫描细胞仪的图像有效像素会小至与高分辨数字显微镜***样（0.5um），但它的空间分辨率会低些，因为激光的聚焦光束大于***个像素的空间。

激光光束特性

激光作为细胞仪的光源是因为它所输出的激光能被聚焦成为很小斑点。然而，根据激光基础物理学，聚焦光斑越小，在光束聚焦后的光路上发生的散射越快。这个现象在共聚焦显微镜和多光子显微镜中都会发生，而它们典型的光斑< 1um，聚焦深度不到***个微米，并且聚焦光斑在每个检测点上会快速上下移动。这样便可在薄的标本切片上获得高分辨率荧光图像或三维结构图。典型的流式细胞仪聚集光斑的尺寸50-120um宽—形成***个比样本流宽的稳定的光束；光斑的高度为5-50nm；更窄的聚焦光束可得到更为详细的有关细胞尺寸的信息，但因光线的发散，会使在极小角度收集散射光的步骤复杂化。激光光斑宽度和高度的临界尺寸在几百微米左右。当光束高度比细胞小时，流式细胞仪的空间分辨率好；当光束增大赶到比细胞大几倍时，分辨率降低直至无信号出现。

在激光扫描细胞仪中，聚焦光斑，或腰部（***细处，典型的为2.5-10um）界于流式细胞仪和共焦之间。聚焦的深度为100um，可在载玻片或毛细管中形成并收集统***的信号。尽管图像的像素之间有间隔（0.5-4um），但视觉的分辨率却不高，因为聚焦光斑（2.5-10um）比像素本身要大。